- для алкилдиметилбензиламмония хлорида, полигексаметиленгуанидин гидрохлорида, третичного амина - универсальный нейтрализатор (твин 80 - 3 %, сапонин - 3 %, гистидин - 0,1 %, цистеин - 0,1 %, лецитин - 0,1 %);

- для глутарового альдегида - универсальный нейтрализатор;

- для перекиси водорода, хлорамина, натриевой соли дихлоризоциануровой кислоты - 1,0 %-ный раствор тиосульфата натрия;

- для спиртов - универсальный нейтрализатор.

4.6 Приготовление испытуемых растворов

Испытуемые растворы ДВ или ДС готовят по ГОСТ Р 58151.4, используя в качестве растворителя стерильную дистиллированную воду.

4.7 Проведение испытаний

4.7.1 Аппаратура и материалы

4.7.1.1 Термостат любой конструкции, позволяющий установить температуру инкубирования в зависимости от используемого тест-микроорганизма.

4.7.1.2 Пробирки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336.

4.7.1.3 Чашки Петри по ГОСТ 25336.

4.7.1.4 Часы по ГОСТ 27752.

4.7.1.5 Вода дистиллированная по ГОСТ Р 58144.

4.7.2 Порядок проведения испытаний

В стерильную химическую пробирку (число пробирок должно соответствовать числу используемых концентраций) помещают 4,5 см ³ испытуемого раствора ДВ или ДС соответствующей концентрации, в которую добавляют 0,5 см ³ взвеси, содержащей мк/см ³ тест-микроорганизма, и тщательно перемешивают.

Время воздействия в зависимости от средней устойчивости микроорганизмов к испытуемой группе ДВ или ДС устанавливают:

- для наиболее чувствительных микроорганизмов (бактерий в вегетативной форме) - до 15 мин;

- для умеренно устойчивых (грибов, кроме плесневых, микобактерий и вирусов) - до 30 мин;

- для устойчивых (плесневых грибов) - до 60 мин;

- для наиболее устойчивых (бактерий в споровой форме) - 120 мин и более.

При определении антимикробной активности кожных антисептиков для установления времени воздействия включенных в них ДВ учитывают предъявляемые к ним требования, а именно наличие широкого спектра антимикробного действия в течение короткого промежутка времени (с учетом устойчивости тест-микроорганизмов к спиртам). Данный промежуток времени должен быть установлен:

- для наиболее чувствительных микроорганизмов (бактерий в вегетативной форме) - до 0,5 мин;

- для умеренно устойчивых (грибов) - до 1,0 мин;

- для устойчивых (микобактерий и вирусов) - до 2,0 мин.

После завершения времени воздействия испытуемого раствора ДВ или ДС в пробирку добавляют 5 см ³ нейтрализатора, тщательно перемешивают и оставляют на 10 мин. Затем полученную суспензию высевают по 1 см ³ в две пробирки с жидкой средой и по 0,1 см ³ в две чашки Петри на плотную питательную среду в зависимости от используемого тест-микроорганизма. Температуру инкубирования посевов в термостате, сроки учета результатов испытания устанавливают в зависимости от используемого тест-микроорганизма.

4.7.3 Контрольные испытания

Контрольные испытания проводят аналогично, но без испытуемого ДВ или ДС, вместо которых используют растворитель - стерильную дистиллированную воду.

4.8 Результаты испытаний

Оценивают результаты трех испытаний по наличию или отсутствию роста микроорганизмов в жидкой и на плотной питательных средах, а затем проводят их сравнение с результатами контрольных испытаний.

Минимальной эффективной концентрацией считают минимальную концентрацию раствора ДВ или ДС, при которой фиксируют отсутствие роста микроорганизмов при установленном времени воздействия и при наличии типичного роста тест-микроорганизма в контроле.

В таблицах А.1 - А.10 (приложение А) приведены определенные данным методом показатели минимальных эффективных концентраций наиболее часто применяемых в настоящее время ДВ, входящих в состав ДС.

Минимальные эффективные концентрации наиболее часто применяемых действующих веществ, определенные суспензионным методом

В настоящем приложении приведены наиболее часто применяемые ДВ, в отношении которых был использован суспензионный метод определения их антибактериальной активности с установлением минимальных эффективных концентраций.

А.1 Алкилдиметилбензиламмоний хлорид (АДБАХ, алкил от С12 до С16, CAS N 63449-41-2), 50 %-ный водный раствор.

А.2 Полигексаметиленгуанидин гидрохлорид (ПГМГ, CAS N 57028-96-3), содержание основного вещества более 95 %.

А.3 N,N-бис(3-аминопропил)додециламин (ТА, триамин, CAS N 2372-82-9), водный раствор с содержанием основного вещества 30 %.

А.4 Натриевая соль дихлороизоциауноровой кислоты дигидрат (ДХЦК, CAS N 51580-86-0), содержание активного хлора не менее 55 %.

А.5 Хлорамин Б (CAS N 304655-80-9), содержание активного хлора от 25 % до 27 %.

А.6 Глутаровый альдегид (ГА, CAS N 111-30-8), 50 %-ный водный раствор.

А.7 Перекись водорода медицинская (ПВ) по ГОСТ 177.

А.8 1-Пропанол (CAS N 71-23-8), содержание основного вещества не менее 99 %.

А.9 2-Пропанол (CAS N 67-63-0), содержание основного вещества не менее 99 %.

А.10 Этанол, высший сорт, по ГОСТ Р 55878.

Таблица А.1 - Минимальные эффективные концентрации алкилдиметилбензиламмоний хлорида (АДБАХ)

Вид тест-микроорганизма	Время гибели тест-микроорганизма, мин	Минимальная эффективная концентрация, %
Escherichia coli (штамм АТСС 10536)	15	0,300 0,009
Staphylococcus aureus (штамм АТСС 6538-Р)	15	0,200 0,006
Pseudomonas aeruginosa (штамм АТСС 15442)	15	0,300 0,009
Mycobacterium terrae (штамм DSM 43227)	30	Не установлена *
Candida albicans (штамм АТСС 10231)	30	0,300 0,009
Trichophyton mentagrophytes (штамм АТСС 9533)	30	0,500 0,015
Aspergillus brasiliensis (штамм АТСС 16404)	60	1,00 0,02
Споры Bacillus cereus (штамм АТСС 10876)	60	Не установлена **
Poliovirus типа 1 Sabin [вакцинный штамм Sabin (LSc2ab)]	30	0,500 0,015
Adenovirus 5 типа	30	0,100 0,003
* Mycobacterium terrae не погибают от воздействия раствора АДБАХ в концентрации не более 5,0 % в течение 30 мин. ** Споры Bacillus cereus не погибают от воздействия раствора АДБАХ в концентрации не более 30 % при воздействии растворов в течение 60 мин.

Таблица А.2 - Минимальные эффективные концентрации полигексаметиленгуанидин гидрохлорида (ПГМГ)

Вид тест-микроорганизма	Время гибели тест-микроорганизма, мин	Минимальная эффективная концентрация, %
Escherichia coli (штамм АТСС 10536)	15	0,040  0,002
Staphylococcus aureus (штамм АТСС 6538-Р)	15	0,040 0,002
Pseudomonas aeruginosa (штамм АТСС 15442)	15	0,050 0,003
Mycobacterium terrae (штамм DSM 43227)	30	Не установлена *
Candida albicans (штамм АТСС 10231)	30	0,600 0,018
Trichophyton mentagrophytes (штамм АТСС 9533)	30	0,900 0,027
Aspergillus brasiliensis (штамм АТСС 16404)	60	5,00 0,10
Споры Bacillus cereus (штамм АТСС 10876)	60	Не установлена *
Poliovirus типа 1 Sabin [вакцинный штамм Sabin (LSc2ab)]	30	0,300 0,009
Adenovirus 5 типа	30	0,200 0,006
* Mycobacterium terrae не погибают от воздействия раствора ПГМГ в концентрации не более 20,0 % в течение 30 мин. Споры Bacillus cereus не погибают от воздействия раствора ПГМГ в концентрации не более 30,0 % в течение 60 мин.

Таблица A.3 - Минимальные эффективные концентрации N,N-бис(3-аминопропил) додециламина (третичный амин)

Вид тест-микроорганизма	Время гибели тест-микроорганизма, мин	Минимальная эффективная концентрация, %
Escherichia coli (штамм АТСС 10536)	15	0,100 0,003
Staphylococcus aureus (штамм АТСС 6538-Р)	15	0,070 0,004
Pseudomonas aeruginosa (штамм АТСС 15442)	15	0,100 0,003
Mycobacterium terrae (штамм DSM 43227)	30	1,00 0,02
Candida albicans (штамм АТСС 10231)	30	0,500 0,015
Trichophyton mentagrophytes (штамм АТСС 9533)	30	0,800 0,024
Aspergillus brasiliensis (штамм АТСС 16404)	60	2,00 0,04
Споры Bacillus cereus (штамм АТСС 10876)	60	Не установлена *
Poliovirus типа 1 Sabin [вакцинный штамм Sabin (LSc2ab)]	30	0,050 0,003
Adenovirus 5 типа	30	0,020 0,001
* Споры Bacillus cereus не погибают под воздействием раствора триамина в концентрации не более 30,0 % при воздействии раствора в течение 60 мин.