Действующий
Escherichia coli - питательная среда для выделения энтеробактерий (агар Эндо-ГРМ) и питательный бульон для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-бульон);
Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus - питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-агар) и питательный бульон для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-бульон);
Candida albicans, Trichophyton mentagrophytes, Aspergillus brasiliensis - питательная среда N 2 ГРМ (Сабуро) и питательная среда для культивирования дрожжей и грибов сухая (бульон Сабуро сухой);
Bacillus cereus (вегетативная форма) - питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-агар) и питательный бульон для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-бульон);
Poliovirus типа 1 Sabin (вакционный штамм LSc2ab) - среда Игла MEM с двойным набором аминокислот и глутамином;
Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus - (37 1) °C - 48 ч (на плотной среде), 7 сут (на жидкой среде);
Рабочую суспензию тест-микроорганизма для определения антимикробной активности готовят из культуры данного тест-штамма, выращенного на плотной питательной среде при температуре и в течение времени, оптимальных для данного тест-микроорганизма в соответствии с [1]. Для приготовления микробной взвеси культуру смывают с агара стерильным физиологическим раствором. Полученную взвесь фильтруют с помощью стерильного ватно-марлевого фильтра и разводят стерильным физиологическим раствором до концентрации клеток в 1 см 3, соответствующей трем единицам Мак-Фарланда, определяемым с помощью денситометра.
Приготовление рабочей культуры тест-вируса и порядок проведения испытаний по определению вирулицидной активности осуществляют в соответствии с [1], пункт 5.7.3.
Для нейтрализации антимикробного действия ДС из различных химических групп применяют следующие нейтрализаторы:
- для алкилдиметилбензиламмония хлорида, полигексаметиленгуанидин гидрохлорида, третичного амина - универсальный нейтрализатор (твин 80 - 3 %, сапонин - 3 %, гистидин - 0,1 %, цистеин - 0,1 %, лецитин - 0,1 %);
- для перекиси водорода, хлорамина, натриевой соли дихлоризоциануровой кислоты - 1,0 %-ный раствор тиосульфата натрия;
Испытуемые растворы ДВ или ДС готовят по ГОСТ Р 58151.4, используя в качестве растворителя стерильную дистиллированную воду.
В стерильную химическую пробирку (число пробирок должно соответствовать числу используемых концентраций) помещают 4,5 см 3 испытуемого раствора ДВ или ДС соответствующей концентрации, в которую добавляют 0,5 см 3 взвеси, содержащей мк/см 3 тест-микроорганизма, и тщательно перемешивают.
Время воздействия в зависимости от средней устойчивости микроорганизмов к испытуемой группе ДВ или ДС устанавливают:
При определении антимикробной активности кожных антисептиков для установления времени воздействия включенных в них ДВ учитывают предъявляемые к ним требования, а именно наличие широкого спектра антимикробного действия в течение короткого промежутка времени (с учетом устойчивости тест-микроорганизмов к спиртам). Данный промежуток времени должен быть установлен:
После завершения времени воздействия испытуемого раствора ДВ или ДС в пробирку добавляют 5 см 3 нейтрализатора, тщательно перемешивают и оставляют на 10 мин. Затем полученную суспензию высевают по 1 см 3 в две пробирки с жидкой средой и по 0,1 см 3 в две чашки Петри на плотную питательную среду в зависимости от используемого тест-микроорганизма. Температуру инкубирования посевов в термостате, сроки учета результатов испытания устанавливают в зависимости от используемого тест-микроорганизма.